Haematologic HCP-0010說明書

HTI HCP-0010

Haematologic Technologies，Inc。（HTI）是一家ISO 9001：2015注冊公司，是一家專業(yè)從事體外研究用高質(zhì)量血漿蛋白分離和表征的主要制造商。HTI的重點是凝血級聯(lián)中涉及的蛋白質(zhì)，以及骨代謝的調(diào)節(jié)。HTI產(chǎn)品系列包括超過150種高度純化和充分表征的蛋白質(zhì)，包括酶原，酶，輔因子和抑制劑，以及單克隆和多克隆抗體的互補(bǔ)系列。還可提供因子缺乏的等離子體和定制的血液采集管，用于臨床研究。提供的服務(wù)包括定制蛋白質(zhì)純化，蛋白質(zhì)修飾，化驗開發(fā)，合同制造和合同研究。

Haematologic HCP-0010說明書

Prothrombin and Fragments

凝血酶原和片段

凝血酶原
的結(jié)構(gòu)域表示凝血酶原的結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)，其中：GLA =含有γ-羧基谷氨酸殘基的區(qū)域，KRINGLE =內(nèi)部序列同源性區(qū)域，催化域=含有絲氨酸蛋白酶催化三聯(lián)體的區(qū)域。箭頭表示在酶原激活期間被因子Xa蛋白水解切割的位點。

 HCP-0010 人體凝血酶原

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 HCP1-0010 人類凝血酶原片段1

 HCP12-0010 人類凝血酶原片段1.2

 HCP2-0010 人類凝血酶原片段2

 HCP1-0011 人類凝血酶原-1

 HCP2-0011 人類凝血酶原-2

 BCP-1010 牛凝血酶原

 MCP-5010 鼠標(biāo)凝血酶原

· 概觀

凝血酶原是一種維生素K依賴性血漿蛋白，在肝臟中合成（1）。在分泌到血漿中之前，凝血酶原通過維生素K依賴性羧化酶進(jìn)行翻譯后修飾，該羧化酶將10種特異性谷氨酸殘基轉(zhuǎn)化為γ-羧基谷氨酸（gla）。10個gla殘基位于成熟蛋白質(zhì)的前40個氨基酸內(nèi)，并且有助于凝血酶原結(jié)合帶負(fù)電荷的磷脂膜的能力。凝血酶原包含兩個內(nèi)部同源區(qū)域，稱為“kringle”結(jié)構(gòu)。這些顯著的二級結(jié)構(gòu)區(qū)域位于成熟血漿蛋白的殘基40和270之間，并取代在幾種其他血漿絲氨酸蛋白酶中發(fā)現(xiàn)的生長因子結(jié)構(gòu)域。到目前為止，這些地區(qū)沒有任何功能，但有人懷疑它們可能在涉及凝血酶原的幾種二元蛋白質(zhì)相互作用中發(fā)揮作用。成熟的單鏈蛋白質(zhì)作為酶原在血漿中循環(huán)，并且在凝固過程中，蛋白水解活化成有效的絲氨酸蛋白酶α-凝血酶。這種蛋白水解是由凝血酶原酶復(fù)合物催化的。在激活期間，凝血酶原在Arg271-Thr272（人）/ Arg273-Thr274（牛）和Arg320-Ser321（人）/ Arg323-Ser324（牛）切割成“pro”片段（片段1.2）和凝血酶，后者其中兩條鏈由二硫鍵共價連接。在人凝血酶原/凝血酶的情況下，在Arg284-Thr285處存在另外的凝血酶反饋切割，導(dǎo)致從成熟凝血酶“A”鏈中除去另外的13個氨基酸。

如Bajaj及其同事所述，人凝血酶原由新鮮冷凍的人血漿制備（2）。使用Owen及其同事描述的方法的改進(jìn)，從新鮮牛血漿制備牛凝血酶原（3）。純化的凝血酶原以50％（vol / vol）甘油/ H2O供應(yīng)，應(yīng)儲存在-20oC。通過SDS-PAGE分析測定純度，并在凝血酶原轉(zhuǎn)化為凝血酶后通過凝固和/或生色底物測定來測量活性。

• Mann，KG等，Methods in Enzymology，45,156（1976）。
• Bajaj，SP，et al。，Prep。Biochem。，11,397（1981）。
• Owen，WG，et al。，J.Biol.Chem。Chem。，249,594（1974）。
• Kisiel，W.，et al。，Biochem。生物物理學(xué)。Acta，304,103（1973）。
• Magnusson，S.，et al。，In Proteases in Biological Control，ed。E. Reich，DB Rifkin，E。Shaw，pp.123-149。紐約：冷泉港實驗室，1975年。
• Discipio，RG等，Biochemistry，18,899（1979）。

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